13.5.1.1 试剂的纯度
整个试验均使用化学纯的试剂。除非另有规定,所有的化学试剂均应符合美国化学协会分析试剂会规范,他们那里可获得这些规范。
13.5.1.2 水的纯度
除非另有规定,所用的水应该是蒸馏水或相同纯度的水。
13.5.2 混合孢子悬浮液的制备
应使用以下试验:
ATCC
黑曲霉(Aspergillus niger) 9642
(Aspergillus flavus) 9643
杂色曲霉(Aspergillus versicolor) 11730
绳状青霉(Penicillium funiculosum) 11797
球毛壳霉(Chaetomiumglobosum) 6205
13.5.5 试验样品和对照样品的接种
a. 将试验样品和对照样品安装在适当的样品架或悬挂到挂钩上;
b. 将试验箱及箱内样品在30℃和97%±2%的相对湿度条件下预处理至少4h; c. 用预先灭菌的喷雾器或以雾化的形式将混合霉菌孢子悬浮液喷到试验样品和对照样品 上,对试验样品和对照样品接种。在向试验样品和对照样品喷菌时,注意将孢子悬浮液布满整个表面。 如表面不润湿,则一直喷到液滴凝聚为止。接种后应立即开始培养。
13.5.6 培养
a. 在整个试验期间,保持试验箱温度在30℃和相对湿度为97%±2%的(值)。除检查期间或装 入其他试验样品外,在培养期间都应关闭试验箱;
b. 7 天后,检查对照样品上霉菌的生长情况,以确定环境条件是否适宜霉菌生长。如果检查表明环 境条件不适宜霉菌生长,则整个试验应重做;
c. 如果对照样品上霉菌生长良好,则继续试验,试验时间从接种时算起28天,或按设备规范的规定。
13.5.8 注意事项
本试验中规定的,通常对操作人员没有严重危害。对个别人来说,可能会对霉菌中的某一过敏,因此,进行本试验时应谨慎为好。带上手套保护手,注意不要将悬浮液溅到皮肤或衣服上。 此外,在进行霉菌接种前宜发布公告,告知可能进入正在进行霉菌喷孢子培养或试验准备区域附近的人员,带上和手套,谨防霉菌暴露造成不良的健康反应。 在试验箱(室)培养期间,还可能有偶然闯入的外来孢子得到培养,这些霉菌可能也会对人体造成伤害。因此,暴露后的试验样品有可能成为有害物,操作时宜格外小心。 危险的是,如果一些有害的外来孢子存在于暴露过霉菌的试验样品上,它们以细小、干燥、分散的微粒在空气中传播并吸入人体肺内。但这种情况一般只发生在试验样品干燥之后。如果把试验样品在其干燥之前很快从试验箱中转入到常用的化学通风橱中,那么流动的空气也就接触不到操作者,分散的菌丝片断就不会进入人的鼻腔。 分散的片断非常小,以至于带纱布口罩也起不到防护作用,而只有可防护超微粒的防毒面具才 有效。因此,在进行本试验时,使用上述建议的通风橱是一种适当的预防措施。 在试验场所可能含有一些有害的霉菌,残留在试验箱里,当清理试验箱时仍存在类似的危险。高温 蒸汽作为一种优先选用的清理方法,可以保证试验箱完全无害。但是,凡采用环氧丙烯熏蒸的地方,应 注意,冲洗之前进行熏蒸才能保证从箱体内冲洗出的所有残余物完全无害。
14.3.4 盐溶液的制备
盐为氯化钠,折干计算,其含量应不多于0.1%,总杂质不多于0.5%。除非另有规定,按重量把5份盐溶解在95份蒸馏水或去离子水中,制备成5±1%的溶液。应通过测量盐溶液的温度和浓度,把溶液的相对密度调整并保持在图14-1的范围内。
14.3.4.1 pH 值的调整
每天应保持和测量盐溶液的pH值,使在35℃下喷雾的盐溶液和按14.3.6.3规定的方法收集到的盐溶液的pH值应在6.5~7.2的范围内。应仅用稀释的化学纯的盐酸或化学纯的来调节pH值。应使用电测量法测量pH值,即用一个带饱和盐桥的玻璃电极, 通过比色法(如用百里酚蓝)测量,或用其他测量仪器或石蕊试纸测量,其测量结果应与电测量法测量的结果相同。新配制的每一批溶液均应按14.3.6.4的规定测量pH值。
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